U periodu od 20. travnja do 4. svibnja 2022. u sklopu usavršavanja na projektu iz područja metabolomike, doktorandica Ana Boban, mag.chem., boravila je u Research and Innovation Center – Fondazione Edmund Mach (FEM) u San Michele all’Adige u Italiji. Domaćin i mentorica na usavršavanju bila je dr.sc. Urška Vrhovšek, voditeljica Jedinice za metabolomiku i naša suradnica na projektu.

Ana Boban je usvojila znanje i stekla praktično iskustvo u profiliranju aroma i lipida iz grožđa i vina. Upoznala se s naprednim analitičkim instrumentima i metodama. Aktivno je sudjelovala u profiliranju aroma ciljanim metaboličkim pristupom pomoću SPE-GC-QqQ-MS/MS i neciljanim pristupom uz SPME-GCxGC-TOF-MS u uzorcima mošta i eksperimentalnih vina sorte “Maraština” iz našeg projekta.

Pored toga, doktorandica je radila na profiliranju lipida ciljanim metaboličkim pristupom korištenjem UPLC/QqQ-MS/MS u uzorcima kožice grožđa sorte “Maraština” s različitih uzgojnih područja. Analize su podrazumijevale pripremu uzoraka, upoznavanje s načinom rada instrumenta, analizu kromatograma te identifikaciju i kvantifikaciju brojnih kemijskih spojeva.

Suradnica na projektu prof. dr.sc. Jasenka Gajdoš Kljusurić prezentirala je rezultate, vezane uz primijenu NIR spektroskopije u utvrđivnje zaštićene oznake izvornosti vina Maraštine, na skupu u sklopu COST Akcije CA 19145 „European Network for assuring food integrity using non-destructive spectral sensors“. Sastanak je održan od 10 do 12. svibnja 2022. u Izoli, Slovenija, a prof dr. Gajdoš Kljusurić je na sastanku sudjelovala kao hrvatska predstavnica i članica Upravnog odbora – Management Committiee COST Action 19145.

Zahvaljujemo COST Akciji 19145 SensorFINT!

U časopisu Foods (IF= 5.561, Q1) objavljen je prvi znanstveni rad na projektu na temu primjene NIR spektroskopije u određivanju fizikalno-kemijskih parametra eksperimentalnih vina sorte Maraština iz podregije Dalmacija, berbe 2021.

Gajdoš Kljusurić, J., Boban, A., Mucalo, A., Budić-Leto, I. Novel Application of NIR Spectroscopy for Non-Destructive Determination of ‘Maraština’ Wine Parameters. Foods, 2022, 11(8), 1172.

Cjeloviti rad dostupan je na poveznici: https://www.mdpi.com/2304-8158/11/8/1172/htm

U sklopu istraživanja na projektu WINE AROMAS, obranjen je prvi diplomski rad pod nazivom „Izolacija i identifikacija ne-Saccharomyces kvasaca iz grožđa sorte Maraština“.  

Diplomski rad je 5. prosinca 2021. uspješno obranio student Pierpaolo Nocchi na Università Politecnica della Marche, Dipartimento di Scienze Agrarie Alimentari e Ambientali, Ancona, Italija pod voditeljstvom suradnice na projektu dr.sc. Vesne Milanović, komentorstvom dr.sc.Federice Cardinali te mentorstvom dr.sc. Cristiane Garofalo. Ovo su ujedno prvi rezultati iz projekta prezentirani u diplomskom radu.

Slijedom planiranih aktivnosti na projektu, nakon mikrobiološke i molekularne identifikacije, završena je i enološka karakterizacija svih izolata. Dobiveni su rezultati otpornosti ne-Saccharomyces kvasaca na različite koncentracije SO₂  i etanola, određen kapacitet proizvodnje H₂S-a, te je ispitana sposobnost rasta na različitim temperaturama, proizvodnja octene kiseline i aktivnost dekarboksilaze hidroksicinaminske kiseline (HCDC).

Na fotografijama su prikazani primjerci rezultata kapaciteta proizvodnje H₂S (slika 1), otpornosti izolata na različite koncentracije SO₂ (slika 2)  i pozitivnih na HCDC (slika 3).

Završena je molekularna identifikacija autohtonih ne-Saccharomyces kvasaca, po prvi put izoliranih iz sorte Maraština. Identifikacija je provedena sekvenciranjem PCR produkata i BLAST (Basic Local Alignment Search Tool) analizom regije ITS1-5.8S-ITS2.

Fotografije u galeriji prikazuju rast predstavnika svih 27 različitih vrsta ne-Saccharomyces kvasaca izoliranih iz grožđa sorte Maraština na diferencijalnoj hranjivoj podlozi WL (Wallerstein Laboratory).

Izolirani kvasci bit će umnoženi na Universita Politecnica delle Marche, Ancona u Italiji i pohranjeni u prvu kolekciju autohtonih kvasaca koja će se uspostaviti na Institutu za jadranske kulture.

Galerija: Izolirani i molekularno karakterizirani autohtoni kvasci na diferencijalnoj hranjivoj podlozi WL

U periodu od 8. do 19. studenog 2021. doktorandica Ana Boban, mag. chem. boravila je na Universita Politecnica delle Marche, Ancona u Italiji radi stručnog usavršavanja. Domaćin i mentor na usavršavanju bila je dr. sc. Vesna Milanović, suradnica na projektu.

Doktorandica Ana je usvojila znanje i stekla praktičke vještine iz osnovnih mikrobioloških metoda izolacije i identifikacije izoliranih ne-Saccharomyces kvasaca iz prve faze projekta. Za vrijeme svog boravka usavršavala se na metodama enološke karakterizacije izoliranih kvasaca, poput ispitivanja otpornosti izolata na različite temperature, koncentracije alkohola i sumporovog (IV) oksida te je provodila ispitivanje aktivnosti enzima kvasaca povezanih s aromom sorte upotrebom enzimskih metoda. Doktorandica Ana Boban se također upoznala s PCR metodom koja se koristila u pripremi uzoraka za molekularnu identifikaciju izoliranih kvasaca iz našeg projekta.

Fourier transformacijski infracrveni spektroskopski (FTIR) uređaj za analizu vina, mošta i mošta u fermentaciji, model Lyza 5000 Wine, s uključenim automatskim izmjenjivačem uzoraka, proizvođača opreme Anton Paar GmbH, instaliran je u Enološkom laboratoriju na Institutu za jadranske kulture i melioraciju krša. Uređaj je nabavljen u Otvorenom postupku javne nabave objavljene 8. lipnja 2021. Dana 27. i 28. listopada 2021. izvršena je napredna edukacija za rad na uređaju za suradnike na projektu. Slijedi validacija FTIR analizatora na uzorcima mošta i vina s referentnim OIV metodama.

FTIR analizator ima mogućnost mjerenja velikog broja kemijskih parametara značajnih za kvalitetu vina. Zahvaljujući automatskom izmjenjivaču uzoraka, vrlo kratkom vremenu analize i malom volumenu uzorka, ovaj uređaj će značajno doprinijeti istraživanju fermentacijske aktivnosti izoliranih autohtonih ne-Saccharomyces kvasaca.

U tijeku je izolacija autohtonih kvasaca iz svježeg grožda sorte Maraština. Izolacija se provodi u Mikrobiološkom laboratoriju kod naše suradnice dr. sc. Vesne Milanović s Politehničkog sveučilišta Marche u Anconi. Na slikama su prikazani kvasci razvijeni na WL hranjivoj podlozi. Vidljiva je različita morfologija kvasaca. Uzorci su pripremljeni za slijedeće faze rada: pročišćavanje i izoliranje DNA, PCR analizu i sekvenciranje PCR produkata.

Rujan je intenzivan mjesec za naš tim. Krenuli smo u obilazak vinograda na području Korčule, Kaštela, zaleđa Zadra i Šibenika s ciljem prikupljanja uzoraka sorte Maraština za izolaciju kvasaca i identifikaciju metabolita grožđa. Ģrožđe smo uzorkovali iz 10 komercijalnih vinograda, različitih vinogorja na položajima – Dračevica, Prapatna, Kruševo, Kaštel Kambelovac, Smilčić, Polača, Stankovci, Vukšić i Oklaj te iz kolekcije autohtonih sorata na Institutu. Odredili smo parametre zrelosti grožđa, izmjerili komponente prinosa, sakupili podatke o položaju i vinogradarskoj praksi. U laboratoriju Instituta prikupljene uzorke smo odvojili za mikrobiološke i kemijske analize. Postavili smo spontane fermentacije u laboratorijskom uvjetima za sve položaje.